J Clin Invest：揭示USP9X去IL-化ALDH1A3并维持GCSs的间充质特性

海绵母蛋白瘤（GBM）是最常见和针对性的人脑恶性，其外观上在于普遍的内表征。尽管最近在多模式疗程方面取得了的发展，但GBM病患的结果仍然令人沮丧。GBM拥有一个蛋白亚群，称为GBM干蛋白（GSCs），具有自我更新活性和多向分化潜能以及起始潜能。因此，迫切需要冒险针对GSC的新疗程策略性。并且，醛脱氢酶（ALDH）超家族包含19种酶，它们将内源和经年累月醛代谢成相应的羧酸。ALDH1A3是主要的ALDH同工酶，参与人体蛋白的各种生常为体过程。更加多的证据暗指，ALDH1A3在乳腺癌干蛋白（CSCs）当中表现单单高活性，并冲击这些蛋白内的各种生常为学外观上。在GBM当中，已找到ALDH1A3作为维持数间充质（MES）GSC的自我更新和致瘤性的关键因素分子。然而，MES GSCs当中ALDH1A3失调的有助于仍然是神秘的。2019年4月8日，南京医科大学第一附属医院王慧博团队等人在The Journal of Clinical Investigation上发表题为“USP9X deubiquitinates ALDH1A3and maintains mesenchymal identity in glioblastoma stem cells”的评论，找到USP9X是一种真正的DUB，可适度ALDH1A3多泛素化和稳定化。并且，USP9X是预测ALDH1A3hi MES GSCs富含的关键因素分子，是MES GSCs自我更新和致瘤性所必需的。同时还评估了USP9X抑制对病患可能的MES GSC梦魇重制建模的潜在治果。为了已确定ALDH1A3复合常为有否被泛素 - 复合常为酶体系统（UPS）翻译后操控，研究课题工作人员首先使用放线菌酮（CHX）阻断复合常为质从头合成并HEK293T蛋白和正常人六角形海绵蛋白（NHAs）当中的ALDH1A3复合常为质素质。严格来说，ALDH1A3在CHX妥善处理的8天内内逐渐分解并几乎检测不到。此外，用复合常为酶体抗病毒MG-132妥善处理蛋白引发ALDH1A3复合常为素质显着增加。这些资料暗指ALDH1A3通过UPS分解。紧接著，研究课题工作人员寻求鉴定负责ALDH1A3稳定化的潜在DUB，并使用抑制剂HEK293T蛋白当中的98DUB的siGENOMERTF文库顺利进行RNAi挑选。该研究课题初始挑选鉴定了与ALDH1A3理解系统性的4个DUB（USP3，USP9X，USP22和OTUD1）。当这些DUB与HEK293蛋白当中的ALDH1A3共理解时，找到只有USP9X并能与内源性ALDH1A3如此一来化学键，从而暗指USP9X是操控ALDH1A3稳定性的显着候选常为。为了验证这一点，将Flag标上的WT USP9X或催化失活的突变体C1566A USP9X（在催化糖复合常为的一个关键因素半胱氨酸当中携带点突变）转染到HEK293T蛋白当中。 WT USP9X而非C1566A突变体的理解以剂量依赖性形式增加ALDH1A3复合常为素质，暗指USP9X以依赖于其DUB活性的形式适度ALDH1A3。海绵母蛋白瘤（GBM）干蛋白（GSC）的数间充质（MES）变异代表癌蛋白亚群，其因其高度侵扰性和对常规疗法的抗性而出名。最近已明确提单单醛脱氢酶1A3（ALDH1A3）作为维持GSC的MES外观上的关键因素密切相关。然而，支持异常ALDH1A3理解的有助于仍然难以捉摸。在该研究课题当中，研究课题工作人员找到泛素特异性复合常为酶9X（USP9X）是MES GSC当中ALDH1A3的真正去泛素化酶。 USP9X与ALDH1A3化学键，异构化并稳定化。此外，研究课题结果显示FACS分选的USP9Xhi蛋白富含具有高ALDH1A3活性和有效致瘤潜能的MES GSC。USP9X的消耗显着上调ALDH1A3，引发MES GSC的自我更新和致瘤潜能的丧失，这可以通过ALDH1A3的异位理解得到很大程度的挽救。此外，研究课题工作人员还推论USP9X抗病毒WP1130诱发ALDH1A3分解并且在MES GSC衍生的原位梦魇重制建模当中显示单单显着的疗程功效。另外，USP9X与原发性人GBM材料当中的ALDH1A3理解强烈系统性，并且对于具有MES亚组的病患具有结节病意义。总的来说，研究课题结果揭示了USP9X作为ALDH1A3复合常为稳定化的关键因素去泛素化酶和GSC定向疗程的潜在靶点。原始单单处：Zhengxin Chen，et al.USP9X deubiquitinates ALDH1A3 and maintains mesenchymal identity in glioblastoma stem cells.J Clin Invest.April 8， 2019